第一步是 “激發(fā)",儀器會(huì)發(fā)出特定波長(zhǎng)的光(激發(fā)光),照射到待檢測(cè)的樣品上。
第二步是 “發(fā)光與檢測(cè)",樣品中的目標(biāo)物質(zhì)吸收激發(fā)光能量后,會(huì)釋放出波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光(熒光),儀器的檢測(cè)器會(huì)捕捉這種熒光的強(qiáng)度。
最后通過(guò)熒光強(qiáng)度和已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)比,就能算出未知樣品中目標(biāo)物質(zhì)的含量,就像用 “標(biāo)準(zhǔn)尺" 量出未知的 “長(zhǎng)度" 一樣。
檢測(cè)物質(zhì)含量:比如檢測(cè)飲用水里的重金屬(如汞、鎘)、食品中的維生素(如維生素 B2),或者生物樣本里的蛋白質(zhì)、核酸,通過(guò)熒光強(qiáng)度直接算出具體含量。
分析物質(zhì)特性:判斷物質(zhì)的純度,比如某些藥品里的雜質(zhì)會(huì)發(fā)出特定熒光,通過(guò)檢測(cè)是否有多余熒光,就能知道藥品純不純;還能研究物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu),比如判斷有機(jī)化合物的官能團(tuán)。
環(huán)保與科研:在環(huán)保領(lǐng)域,檢測(cè)廢水里的污染物(如農(nóng)藥殘留、多環(huán)芳烴);在生物科研中,觀察細(xì)胞內(nèi)的熒光標(biāo)記物質(zhì),研究細(xì)胞活動(dòng)。
樣品要處理好:樣品不能有渾濁、沉淀,否則會(huì)擋住光線,導(dǎo)致熒光強(qiáng)度不準(zhǔn);如果樣品濃度太高,會(huì)出現(xiàn) “熒光猝滅"(濃度越高,熒光反而變?nèi)酰?,需要提前稀釋到合適濃度。
控制實(shí)驗(yàn)環(huán)境:溫度會(huì)影響熒光強(qiáng)度,比如溫度升高,很多物質(zhì)的熒光會(huì)變?nèi)?,所以盡量在恒溫環(huán)境下檢測(cè);另外,避免強(qiáng)光直射儀器,防止外界光線干擾檢測(cè)結(jié)果。
定期校準(zhǔn)儀器:就像秤要定期調(diào)準(zhǔn)一樣,熒光光度計(jì)也需要用標(biāo)準(zhǔn)樣品校準(zhǔn),比如每次檢測(cè)前用已知濃度的熒光標(biāo)準(zhǔn)液測(cè)試,確保儀器讀數(shù)準(zhǔn)確,不然測(cè)出來(lái)的結(jié)果可能 “差之千里"。





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